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科技研发

前胸腺素基因重组质粒构建和表达产物定性定量

时间:2007-12-21 11:36:03  来源:  编辑:
    在人类疾病治疗中,本产品可用于系统性红斑狼疮、乙型、丙型肝炎、非典型肺炎等病毒性疾病、免疫缺陷病、癌症、男女不育、艾滋病、心血管和神经疾病的治疗。该药物还可用于某些动物疾病的治疗,如鸡传染性贫血、腺病毒病、禽流感、传染性法式囊病、大肠杆菌病、沙门氏菌病等。
    目前,国内外主要采用动物组织,如从动物胸腺提取方法制备胸腺素。此外,也有采用生物合成法生产胸腺素α1的报道。市场所售的胸腺素成本高、产量低、价格昂贵。本技术是利用基因工程法生产胸腺素的一种创新技术,即,将牛前胸腺素基因克隆到细菌的基因组中,通过重组工程菌的发酵液来生产前胸腺素α,生产工艺主要涉及细菌发酵,蛋白提取纯化等,工艺路线简单,可以工业化生产。生产成本大幅降低。
    课题组先后开展了“牛前胸腺素-α(ProT-α)基因的克隆和鉴定”、真核和原核基因重组工程菌等研究工作,取得了如下结果: 
开展了犊牛前胸腺素-α(ProT-α)基因的克隆和鉴定等研究,获得了犊牛ProT-α的cDNA基因,该基因由1039bp组成,已提交GenBank数据库(注册号:DQ333385);构建了犊牛ProT-α基因重组酵母菌株,摇瓶表达量达到30mg•L-1;构建了大肠杆菌重组工程菌,对表达产物进行了定性和定量鉴定,结果表明ProT-α重组蛋白分子量约为38KD,摇瓶表达量约为161mg•L-1,纯化后产物纯度达到96%以上。
    三、对重组大肠杆菌发酵工艺进行了系统研究,ProT-α重组蛋白工程菌发酵条件经优化,50L发酵罐菌体干重达34g•L-1,重组蛋白表达量占菌体干重的26%,初步达到工业化生产的技术要求。
四、基因表达产物活性测定表明,该融合蛋白可显著增加小鼠NK细胞和脾细胞的活性,与市售意大利人工合成产品(日达仙)比较,具有基本一致的生物活性水平。
    五、本项目已申请国家发明专利一项(专利申请号:200410035736.9),发表研究论文4篇。
    本项目于2006年12月通过山东省科技厅组织的成果鉴定,该研究成果达到了国际同类研究的先进水平。
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